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液相色譜柱的使用方法

瀏覽： 2408| 更新時間：2016-11-09 |
 液相色譜柱的使用方法：
   液相色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要留意： 液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是*條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
1、樣品的前處理：
a、使用活動相溶解樣品。
b、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質(zhì)。
2、活動相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求活動相具備以下的特點(diǎn)：
a、活動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保存在柱中）。
b、活動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特殊情況除外）。
c、活動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命（可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動相的黏度）。
d、活動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、活動相沸點(diǎn)不要太低，否則輕易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
f、在活動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除往溶解在活動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止活動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、活動相流速的選擇：
   因柱效是柱中活動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。